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湖北原位杂交-贝科新肽科技公司-植物染色体原位杂交

武汉贝科新肽科技有限公司

  • 主营产品:原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选
  • 公司地址:湖北省武汉市洪山区关山大道289号紫菘逸景华庭二期109栋2层2002-3号
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以菌落原位杂交为例:对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落(100-200)进行筛选时,可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张纤维素滤膜上。经培养一段时间后,对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。

将少数菌落转移到纤维素滤膜上

(1) 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。

(2) 用无菌牙签将各个菌落先转移至滤膜上,再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种(或打点)。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后,在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。

(3) 倒置平板,于37℃培养至划线的细菌菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。

(4) 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂,在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。

(5) 用Parafilm膜封好主平板,倒置贮放于4℃,直至获得杂交反应的结果。

(6) 裂解细菌,按本段下面所述方法,使释放的DNA结合于纤维素滤膜。












根据核酸探针标记物的种类分别进行自显影或利用酶检测系统进行不同显色处理。细胞或组织的原位杂交切片在显示后均可进行半定量的测定,如自显影可利用人工或计算机辅助的图象分析检测仪(computer-assisted image analysis)检测银粒的数量和分布的差异。非性核酸探针杂交的细胞或组织可利用酶检测系统显色,然后利用显微分光光度计或图像分析仪对不同类型和数量的核酸的显色强度进行检测。



原位杂交技术可以应用于以下场景:

组织中病毒DNA/RNA的检测和定位。例如,可以用于检测EB病毒mRNA、人类状瘤病毒和巨细胞病毒DNA等。

癌基因、抑癌基因及其他各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测。

检测染色体的变化,如染色体数量异常和染色体易位等。

在植物基因组研究中的应用。例如,通过与特定基因序列的探针进行杂交,可以在植物染色体上定位到目标基因的位置,进而构建遗传图谱,为植物育种和基因组研究提供基础数据。