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湖北双分子荧光互补技术-贝科新肽科技公司(在线咨询)

武汉贝科新肽科技有限公司

  • 主营产品:原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选
  • 公司地址:湖北省武汉市洪山区关山大道289号紫菘逸景华庭二期109栋2层2002-3号
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基因法转化洋葱表皮细胞:

分别用70%乙醇和灭菌蒸馏水清洗金粉(直径为1 μm),加入灭菌蒸馏水制成金粉悬浮液,取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋葱表皮的玻璃皿中,边振荡边加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP质粒,逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亚精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2,振荡混匀。基因GDS-80轰击时氦气罐的气压为1 300 psi,取10 μL DNA 包裹好的微粒悬浮液加到基因中央,进行轰击,之后放置25℃避光过夜培养,使用ConfocalLaser激光共聚焦显微镜观察。










蛋白质亚细胞定位的研究方法

1、融合报告基因定位法

将绿色荧光蛋白(GFP)及其衍生蛋白、β-葡萄糖苷酸酶(GUS)等报告基因,与目标蛋白基因融合在一起,由目标蛋白的引导信号进行亚细胞定位,对报告蛋白的光信号进行跟踪和观察,从而确定目标蛋白的定位。该方法是目前使用广泛的蛋白质亚细胞定位研究方法。

2、荧光标记定位法

将反应与化学光学信号相结合,通过特异性的荧光标记与目标蛋白(抗原)结合,通过荧光信号检测,确定目标蛋白的亚细胞位置。目前标记信号不局限于荧光素,还有同位素、酶、胶体金颗粒、纳米金属颗粒等。




在预测阶段,研究人员会利用机器学习算法和已知的基因表达数据来训练模型,从而识别出可能与特定基因表达相关的启动子序列。这些预测的启动子序列将被用作进一步实验的基础。

在实验验证阶段,研究人员会将这些预测的启动子序列与报告基因(如荧光蛋白)一起插入植物的基因组中,然后观察报告基因的表达情况。如果报告基因的表达模式与预期相符,那么就可以认为这个启动子在促进特定基因的表达方面起着关键作用。