一. 原位杂交天
1. 重新水化和固定
1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的PBST溶液,放置5分钟。
2) 置换成30%的PBST溶液,放置5分钟
3) 置换成PBST溶液,放置5分钟,重复一次
4) 置换成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟
5) 用PBST洗两次,每次放置五分钟,室温。
蛋白酶处理与后固定(本实验不做此步)
1) 用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理,5体节到24小时的胚胎处理3分钟,24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶处理,发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织,以便于杂交。
2) 用PBST溶液轻洗,在PBST中放置5分钟。
3) 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟,室温。
4) 用PBST洗两次,每次放置五分钟,室温。
原位杂交技术在其他生物领域也有广泛的应用,例如:
动物行为学研究:在动物行为学中,原位杂交技术可以用于检测动物行为与基因表达之间的关系。例如,通过比较不同行为状态下动物脑组织中基因表达的差异,可以揭示特定基因对动物行为的影响。
生物技术应用:原位杂交技术在生物技术领域也有广泛应用,例如在基因、基因编辑和开发等方面。例如,通过原位杂交技术可以定位和特定基因,为基因和基因编辑提供基础数据和工具。
原位杂交技术还在以下生物领域有应用:
细胞化学和学:原位杂交技术可以用于研究细胞内特定化学物质的定位和分布,例如检测细胞内酶、、神经递质等物质的分布和定位。此外,还可以应用于学研究,例如检测细胞、分子的分布和定位等。
神经科学:在神经科学领域,原位杂交技术常被用于研究神经元的生长、发育和连接等过程。例如,通过标记特定基因的探针,可以检测神经元中特定基因的表达和定位,进而研究其在神经信号传递、神经环路形成等方面的作用。