预杂交
1)每个管中置换成大约300ulHYB-溶液,60℃水浴5分钟,避免振荡。
2)用等体积的HYB+取代HYB-。
3)60℃水浴,预杂交4小时以上。
杂交
1)吸去预杂交的HYB+,加上100ul已加入探针的HYB+溶液(探针浓度约为1ng/ul)..
2)60℃ 温浴过夜。
注:杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等,温度越低,探针结合越好,温度越高,背景越小。
荧光原位杂交(FISH)技术具有以下优点:
高特异性:荧光探针的合成是定向的,保证了杂交过程的特异性,可以有效地降低非特异性杂交和背景干扰。
高灵敏度:荧光信号的检测比性信号的检测更灵敏,可以检测出低拷贝数的DNA序列,甚至可以检测单个基因序列。
快速简便:FISH技术操作简便,杂交过程可以在数小时或数天内完成,而且不需要过于复杂的设备,便于在实验室开展。