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武汉贝科新肽(图)-洋葱亚细胞定位-亚细胞定位

武汉贝科新肽科技有限公司

  • 主营产品:原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选
  • 公司地址:湖北省武汉市洪山区关山大道289号紫菘逸景华庭二期109栋2层2002-3号
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内质网

内质网是细胞中的一个复杂网络,它负责合成和转运蛋白质。为了定位内质网,我们可以使用一种名为GFP-HDEL的蛋白质来标记它们。GFP-HDEL是一种带有绿色荧光的蛋白质,它可以与内质网上的HDEL序列结合。在洋葱细胞中,内质网通常位于细胞的中央或周围。

 高尔基体

高尔基体是细胞中的另一个复杂网络,它负责合成和转运蛋白质。为了定位高尔基体,我们可以使用一种名为FM4-64的化合物来标记它们。FM4-64可以穿过细胞膜并进入高尔基体,从而发出红色荧光。在洋葱细胞中高尔基体通常位于细胞的中央或周围。











基因法转化洋葱表皮细胞:

分别用70%乙醇和灭菌蒸馏水清洗金粉(直径为1 μm),加入灭菌蒸馏水制成金粉悬浮液,取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋葱表皮的玻璃皿中,边振荡边加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP质粒,逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亚精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2,振荡混匀。基因GDS-80轰击时氦气罐的气压为1 300 psi,取10 μL DNA 包裹好的微粒悬浮液加到基因中央,进行轰击,之后放置25℃避光过夜培养,使用ConfocalLaser激光共聚焦显微镜观察。


亚细胞结构分离定位法

通过离心等技术分离各亚细胞结构,然后从分离物种进一步提取蛋白质,对目标蛋白质进行分析或检测,从而获得目标蛋白的定位。本方法适合研究某蛋白质组级别的细胞器定位,通常与双向凝胶电泳分离和质谱技术相结合。

生物信息学预测

通过生物信息学手段,借助一些在线工具对蛋白的亚细胞定位信息进行预测,这种方法可以在短时间获得大量蛋白的预测信息,不仅辅助于实验,还能省时省力节约成本。