技术服务

BIFC-武汉贝科新肽

武汉贝科新肽科技有限公司

  • 主营产品:原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选
  • 公司地址:湖北省武汉市洪山区关山大道289号紫菘逸景华庭二期109栋2层2002-3号
咨询热线: 15002786799
立即咨询 QQ咨询
信息详情
GaMYB2 在洋葱表皮细胞中的瞬时表达分析:采用基因轰击的方法,用包裹质粒的金粉对洋葱表皮进行轰击,暗培养过夜后,在激光共聚焦显微镜下进行观察,从图A 中可以看出对照GFP空载体在整个洋葱细胞均能看到绿色荧光,为组成型表达;从图B 中发现GaMYB2-GFP 的融合表达载体只能在细胞核中能看到绿色荧光,这进一步证明该蛋白不具有跨膜蛋白结构,定位在细胞核中,具有转录因子的一般特征。










蛋白质亚细胞定位的研究方法

1、融合报告基因定位法

将绿色荧光蛋白(GFP)及其衍生蛋白、β-葡萄糖苷酸酶(GUS)等报告基因,与目标蛋白基因融合在一起,由目标蛋白的引导信号进行亚细胞定位,对报告蛋白的光信号进行跟踪和观察,从而确定目标蛋白的定位。该方法是目前使用广泛的蛋白质亚细胞定位研究方法。

2、荧光标记定位法

将反应与化学光学信号相结合,通过特异性的荧光标记与目标蛋白(抗原)结合,通过荧光信号检测,确定目标蛋白的亚细胞位置。目前标记信号不局限于荧光素,还有同位素、酶、胶体金颗粒、纳米金属颗粒等。




洋葱亚细胞定位的步骤一般包括以下内容:取材:选取适当的新鲜洋葱材料。

固定:使用适当的固定剂对洋葱材料进行固定,以便进行后续的实验操作。

切片:将固定好的洋葱材料切成薄片,以便观察。

荧光染料标记:选取适当的荧光染料,对洋葱细胞的亚细胞结构进行标记。例如,可以用荧光染料标记叶绿体或线粒体等细胞器。

观察:使用荧光显微镜观察标记的洋葱细胞的亚细胞结构,观察各细胞器的位置和分布情况。

分析:通过图像处理软件对观察到的亚细胞结构进行定性和定量分析,例如计算各细胞器的面积、周长、形状因子等参数。

总结:根据实验观察和分析结果,得出结论,总结出洋葱细胞的亚细胞结构分布和特点。